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　　蛋白与多肽的反相色谱机理是：在梯度洗脱的条件下，蛋白与多肽首先吸附于柱头，当流动相中的有机相浓度不断增加达到使其脱附的临界点时，蛋白与多肽就从填料上脱附下来进入流动相，且在随流动相流出色谱柱的整个过程中都不再与填料发生吸附再脱附的保留分离作用，因此对于蛋白与多肽的反相色谱分离分析，长的C18色谱柱并不能有效增加分离度。使用柱长很短、分辨率很高的ProZAP柱，用较高流量、快速梯度就可以在短得多的时间内完成分离分析。